Mesure de polymorphisme et Amplification !

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Mesure de polymorphisme et Amplification ! Empty Mesure de polymorphisme et Amplification !

Message  Adrien le Sam 20 Déc - 18:45

Salut les genet',

J'ai un dilemme :
je ne vois pas vraiment de différence entre la methode de RFLP-PCR et celle dite d'AFLP ?
Y'a t il une différence, ou est-ce-deux noms pour une methode equivalent ?

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Mesure de polymorphisme et Amplification ! Empty Re: Mesure de polymorphisme et Amplification !

Message  Julien le Sam 20 Déc - 19:23

C'est plutôt la différence entre PCR-RFLP (dans cet ordre) et AFLP, non?
En PCR-RFLP tu amplifies une séquence particulière du génome total et après ça tu réalises une digestion avec enzyme de restriction afin d'obtenir des fragments de ta séquence de tailles différentes et ainsi mettre en évidence du polymorphisme.

En AFLP c'est grosso modo la procédure inverse, c'est-à-dire que tu fais d'abord la digestion de ton ADN total et ensuite tu amplifies les fragments obtenus en mettant des adaptateurs je crois et des amorces spécifiques du site de restriction je pense.

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Mesure de polymorphisme et Amplification ! Empty Re: Mesure de polymorphisme et Amplification !

Message  Adrien le Sam 20 Déc - 19:33

Ah ok, je vois l'idée...
Je comprend la différence méthodo

Mais au final ? ça a une différence réelle ?
Parce que que tu coupes puis amplifie, ou amplifie puis coupe, si tu utilises les mêmes enzymes de restriction, ça change pas grand chose ?
Sauf peut être que pour l'AFLP, l'enzyme ne coupe pas aussi bien tous les sites et peut créer un polymorphisme de longueur qui n'aurait pas lieu d'etre ???
Mesure de polymorphisme et Amplification ! 80566

(Je suis pas très au point sur ces méthodes, excuse moi des questions peut être un peu idiotes)

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Message  Julien le Sam 20 Déc - 20:56

il y a une différence notable car en PCR-RFLP tu révèles le polymorphisme que sur une séquence particulière, que tu as choisie, alors qu'en AFLP le polymorphisme mis en évidence est réparti sur le génome complet (ADN total). Donc l'AFLP est une très bonne technique pour mettre en évidence facilement du polymorphisme de restriction sauf que tu ne sais pas vraiment ce que tu amplifies et tu obtiens surtout une quantité d'information très supérieure à la PCR-RFLP et je pense qu'analyser le polymorphisme peut devenir alors très compliqué. Après je suis pas du tout spécialiste. Y a t'il des biomolécularistes qui pourraient nous en dire plus??

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